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              細菌芽孢染色法

              原理

              芽孢染色法是利用細菌的芽孢和菌體對染料的親合力不同的原理,用不同染料進行著色,使芽孢和菌體呈不同的顏色而便于區別。芽孢壁厚、透性低,著色、脫色均較困難,因此,當先用一弱堿性染料,如孔雀綠(malachitegreen)或堿性品紅(basicfuchsin)在加熱條件下進行染色時,此染料不僅可以進入菌體,而且也可以進入芽孢,進入菌體的染料可經水洗脫色,而進入芽孢的染料則難以透出,若再用復染液(如番紅液)或襯托溶液(如黑色素溶液)處理,則菌體和芽孢易于區分。 

              材料與儀器

              枯草芽孢桿菌 蠟狀芽孢桿菌 生孢梭菌 孔雀綠染液 番紅水溶液 苯酚品紅溶液 黑色素溶液

              步驟

              方法一

              1. 將培養24小時左右的枯草芽孢桿菌或其他芽孢桿菌,作涂片、干燥、固定。

              2. 滴加3~5滴孔雀綠染液于已固定的涂片上。

              3. 用木夾夾住載玻片在火焰上加熱,使染液冒蒸汽但勿沸騰,切忌使染液蒸干,必要時可添加少許染液。加熱時間從染液冒蒸汽時開始計算約4~5分鐘。這一步也可不加熱,改用飽和的孔雀綠水溶液(約7.6%)染10分鐘。

              4. 傾去染液,待玻片冷卻后水洗至孔雀綠不再褪色為止。

              5. 用番紅水溶液復染1分鐘,水洗。

              6. 待干燥后,置油鏡觀察,芽孢呈綠色,菌體呈紅色。

              方法二

              1. 取二支潔凈的小試管,分別加入0.2 ml 無菌水,再往一管中加入1~2接種環的蠟狀芽孢桿菌的菌苔,另一管中加入1~2接種環的生孢梭菌的菌苔,兩管各自充分混合成濃厚的菌懸液。

              2. 在菌懸液中分別加入0.2 ml 苯酚品紅溶液,充分混合后,于沸水浴中加熱3~5分鐘。

              3. 用接種環分別取上述混合液2~3環于兩片載玻片上,涂薄,風干后,將載玻片稍傾斜于燒杯上,用95%乙醇沖洗至無紅色液流出。

              4. 再用自來水沖洗,濾紙吸干。

              5. 取1~2接種環黑色素溶液于涂片處,立即展開涂薄,自然干燥后,油鏡觀察,在淡紫灰色背景的襯托下,菌體為白色,菌體內的芽孢為紅色。
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