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              何時高壓滅菌 何時過濾滅菌

               細胞培養的核心之一是無菌操作,那么,菌從何而來?從人、物品以及環境中來。使用一次性、已滅菌的實驗工具,能有效降低污染引入的風險,但總有一些工具、總有一些環節是需要反復使用的。而這就需要進行清潔和滅菌。

              Part1

              選擇滅菌方法的基本原則 :

              常見的2種操作是高壓滅菌和過濾除菌,主要講一下這兩者的區別和注意事項.

              滅菌方法的選擇主要基于物品在高溫下的穩定性,可抗高溫的物品例如玻璃、金屬、耐熱塑料(PTFE)可采用干熱滅菌;

               

              熱穩定的液體可以采用濕熱滅菌,也就是高壓蒸氣滅菌;熱敏感的塑材可以用乙醇或射線滅菌;熱不穩定的液體可以采用過濾除菌。

              Part2

              高壓滅菌

              常見的高壓滅菌方法是,使用滅菌鍋加熱水提高溫度和壓力來完成,其實驗條件是將實驗工具所處的環境加熱至121°并維持至少20分鐘。

              由于水蒸氣會滲透至整個空間,滅菌結束后需要有一個干燥的過程,高壓蒸汽滅菌適用于熱穩定的液體,例如水、鹽溶液、或一些成份對熱穩定的培養基;例如LB,同時,這種方法也適用于耐熱的塑料,不少離心管、移液器、吸頭、吸頭盒。都是可以通過高壓來滅菌的。

              使用高壓滅菌需要注意2:1 將含有液體的玻璃器皿進行滅菌,如果其使用塑料蓋密封,應在滅菌前擰松蓋子,以防滅菌過程發生爆炸;2 如果實驗工具需要后續用于無菌操作實驗,建議滅菌鍋所用的水使用無菌的超純水,因為滅菌過后,鍋內有可能存在凝結水,而后者可能會存在污染帶入的風險。

               

              Part3過濾除菌

              對于不耐熱的液體,可以使用孔徑為0.1-0.2um的微孔過濾器除菌,過濾的方法分為正壓過濾和負壓過濾,區別在于正壓過濾大多通過外力推壓針筒,使目標液體通過濾器的濾膜后,雜質或污染物留在膜上,液體過濾至新的容器內。負壓過濾是通過將容器外接一個泵,利用泵把容器內的空氣抽走,實現一個負壓的狀態,而液體則從容器上方往下透過濾膜流入容器內。